Получение бесклеточных экстрактов и определение концентрации белка

Биология » Идентификация генов биосинтеза эктоина у метилотрофной бактерии Methylarcula marina » Получение бесклеточных экстрактов и определение концентрации белка

Клетки в экспоненциальной фазе роста центрифугировали (30 мин при 6000 об/мин), дважды отмывали в буфере А (100 мМ трис-НCl, рН 8.0, содержащий 2.5 мМ MgCl2 и 1.5% KCl) и ресуспендировали в том же буфере. Клетки разрушали на ультразвуковом дезинтеграторе MSE (Англия) мощностью 150 Вт при 20 Гц (3×1 мин с минутными перерывами) при охлаждении. Неразрушенные клетки отделяли центрифугированием при 4oС (14000 об/мин в течение 30 мин).

Концентрацию белка определяли модифицированным методом Лоури (Schacterle, Pollack, 1973) с использованием БСА в качестве стандарта.


Также смотрите:

Выбор условий хроматографии (например, для фракционирования смеси белков)
Этот выбор, даже для случая, когда все подлежащие разделению белки известны и, более того, имеются в чистом виде, оказывается делом непростым, требующим немалого опыта, понимания физических процессов, лежащих в основе фракционирования и даже определенной интуиции. Оче ...

Применение витамина D.
В качестве лечебного препарата применяется рыбий жир, богатый витамином D3,который хорошо усваивается (холекальциферол). Натуральный рыбий жир содержит в 1 г. 30 МЕ витамина D3,а витаминизированный жир - в 5 раз больше, т.е. 150 МЕ. Используется масляный, спиртовой и ...

Беспозвоночные долины реки Птыш
Ледниковый экотон рассматривался на примере троговой долины реки Птыш. Склоны трогов при переходе к днищу выположены конусами выноса эрозионных ложбин. В долине Птыша хорошо сохранились следы последней стадии четвертичного оледенения, получившего название 3-его этапа ...